重組兔單克隆抗體制備 服務(wù)編號：SV1600
本服務(wù)項目主要是根據客戶(hù)的要求制備兔單克隆抗體，兔單抗具有高特異性、強親和力的優(yōu)點(diǎn)。兔因其免疫系統發(fā)育的特殊性，能有效識別在小鼠中免疫原性低的抗原或半抗原。因此，與鼠單抗相比，兔單抗在科研、診斷和醫療多個(gè)領(lǐng)域有著(zhù)更好的表現與廣泛的應用，且有更高的親和力和特異性，可識別更多抗原表位，有更多的候選陽(yáng)性克隆，更易于人源化特點(diǎn)。
單B細胞抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)是通過(guò)流式分選技術(shù)，從免疫動(dòng)物或康復者外周血中分離抗原特異性B細胞，利用單細胞測序技術(shù)從單一B細胞中提取抗體重、輕鏈基因，并將抗體基因序列插入高表達載體，從而實(shí)現抗體的高效開(kāi)發(fā)與表達。該技術(shù)獲得抗體重、輕鏈基因天然配對、易于改造，抗體親和力高。相比傳統方法（如雜交瘤技術(shù)），單B細胞抗體技術(shù)顯著(zhù)縮短了開(kāi)發(fā)周期；能夠以較少的細胞量獲得更多的特異性單克隆抗體，且陽(yáng)性克隆數量顯著(zhù)高于傳統方法。
噬菌體展示技術(shù)(Phage Display)是采用分子克隆技術(shù)從脾臟或外周血PMBC中提取抗體重、輕鏈基因，通過(guò)基因工程技術(shù)將抗體的重、輕鏈基因克隆至噬菌粒載體，將抗體基因與噬菌體外殼蛋白（如pIII）融合表達，使抗體展示在噬菌體表面，構建噬菌體文庫，然后通過(guò)加壓篩選獲得高親和力的陽(yáng)性克隆。噬菌體文庫包括包括天然抗體庫、免疫抗體庫、人工改造的庫等，相比傳統抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)，噬菌體展示技術(shù)可以針對各種抗原的抗體，包括蛋白質(zhì)、多肽、細胞表面抗原等篩選和富集數百萬(wàn)個(gè)不同的抗體，極大地提高了篩選效率，并且保留了樣本中抗體種類(lèi)的多樣性。噬菌體展示技術(shù)是一種高效、快速的抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)，具有高通量、高多樣性和易于操作的特點(diǎn)。通過(guò)直接展示抗體蛋白在噬菌體表面，該技術(shù)能夠快速篩選出高特異性和高親和力的抗體，廣泛應用于治療性抗體開(kāi)發(fā)、診斷試劑制備和基礎研究等領(lǐng)域。
Tip: 請您填寫(xiě)項目申請表。以便Bioss為您提供更好的技術(shù)服務(wù)。
一、 服務(wù)流程
1、客戶(hù)提交重組兔單克隆抗體制備請求并明確對抗體的要求，與公司商定具體的制備項目、數量和費用，雙方簽訂《委托單克隆抗體制備合同》。
2、客戶(hù)提供抗原或抗原信息，我公司按照合同要求安排重組兔單克隆抗體制備服務(wù)，并在規定時(shí)間內完成制備委托。
3、抗體制備完成后，我公司按照客戶(hù)要求純化分裝，免費低溫郵寄給客戶(hù)，同時(shí)提供抗體制備報告。
二、 樣品要求
1、客戶(hù)提供制備抗體所需蛋白或多肽片段，抗原純度＞85%，數量＞10mg，濃度＞1mg/ml。
2、客戶(hù)提供的抗原信息應包含蛋白抗原的英文全稱(chēng)、種屬信息、GeneID或序列信息；化合物抗原應提供化學(xué)結構式、活性基團、溶解性等信息。
3、請提前說(shuō)明樣品來(lái)源和生物危害等情況，或其他任何特殊情況。
三、兔單克隆抗體收費標準
1、單B細胞平臺
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服務(wù)項目 |
服務(wù)內容 |
周期 |
收費 |
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抗原制備 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶聯(lián)蛋白10mg（抗原無(wú)毒性）， 乙方用于免疫動(dòng)物和檢測 |
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b. 客戶(hù)提供多肽，博奧森偶聯(lián)載體蛋白 |
1周 |
詢(xún)價(jià) |
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c. 原核系統表達蛋白 |
4周 |
詢(xún)價(jià) |
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d. 設計、合成多肽、偶聯(lián)載體蛋白（15aa左右） |
2周 |
詢(xún)價(jià) |
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e. 磷酸化、甲基化修飾多肽、偶聯(lián)載體蛋白 （包括：設計修飾多肽兩條，分別合成及偶聯(lián)，未修飾多肽一條） |
2周 |
詢(xún)價(jià) |
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f. 特殊修飾多肽 |
4周 |
詢(xún)價(jià) |
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動(dòng)物免疫 血清檢測 |
免疫2只新西蘭大白兔，免疫3-4次，血清效價(jià)采用間接ELISA法， 最終取一只達到效價(jià)>1:16000以上，可滿(mǎn)足單細胞分選 注：甲、乙雙方根據檢測結果最終判定是否項目需要繼續進(jìn)行 （結果要及時(shí)反饋）；甲方自行選擇是否進(jìn)行內源性驗證 |
4-6周 |
詢(xún)價(jià) |
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B細胞分選與培養 |
選出免疫應答最佳的1只兔子，從脾臟或全血中分離PBMC， 采用IgG陽(yáng)性和抗原特異性雙陽(yáng)性通過(guò)流式細胞術(shù)（FACS） 分選記憶性單B細胞至10個(gè)96孔細胞培養板培養 |
2周 |
詢(xún)價(jià) |
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陽(yáng)性克隆對篩選 及B細胞的測序 |
對經(jīng)培養的B細胞克隆進(jìn)行抗原ELISA篩選，陽(yáng)性B細胞上清供 甲方進(jìn)行測試，選取10株單克隆進(jìn)行單B細胞測序， 獲取抗體輕重鏈基因序列。
注：甲方自行選擇是否進(jìn)行內源性驗證 |
1-2周 |
詢(xún)價(jià) |
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陽(yáng)性克隆抗體的 重組表達 |
將擴增得到的抗體基因插入帶有恒定區基因的表達載體中， 然后選擇合適的表達系統進(jìn)行表達， 然后采用Protein A親和純化，最終每個(gè)兔單抗交付不超過(guò)50ug |
4周 |
詢(xún)價(jià) |
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抗體的擴大培養 與純化 |
根據客戶(hù)選定的2-3株克隆，進(jìn)行擴大培養， 并通過(guò)親和層析等純化方法提純抗體
注：甲方自行選擇是否進(jìn)行內源性驗證 |
2周 |
詢(xún)價(jià) |
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產(chǎn)品交付 |
1、2-3個(gè)兔單克隆抗體100ug 2、2-3個(gè)挑選的兔單抗對應的抗體序列 3、項目報告 |
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bioss
2、 噬菌體展示平臺
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服務(wù)項目 |
服務(wù)內容 |
周期 |
收費 |
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抗原制備 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶聯(lián)蛋白10mg（抗原無(wú)毒性）， 乙方用于免疫動(dòng)物和檢測 |
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b. 客戶(hù)提供多肽，博奧森偶聯(lián)載體蛋白 |
1周 |
詢(xún)價(jià) |
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c. 原核系統表達蛋白 |
4周 |
詢(xún)價(jià) |
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d. 設計、合成多肽、偶聯(lián)載體蛋白（15aa左右） |
2周 |
詢(xún)價(jià) |
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e. 磷酸化、甲基化修飾多肽、偶聯(lián)載體蛋白 （包括：設計修飾多肽兩條，分別合成及偶聯(lián)，未修飾多肽一條） |
2周 |
詢(xún)價(jià) |
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f. 特殊修飾多肽 |
4周 |
詢(xún)價(jià) |
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動(dòng)物免疫 血清檢測 |
免疫2只新西蘭大白兔，免疫3-4次，血清效價(jià)采用間接ELISA法， 最終取一只達到效價(jià)>1:16000以上，可滿(mǎn)足繼續實(shí)驗； 注：甲、乙雙方根據檢測結果最終判定是否項目需要繼續進(jìn)行 （結果要及時(shí)反饋） |
8-10周 |
詢(xún)價(jià) |
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B細胞收集 |
采集外周血，分離PBMC或取脾臟組織，提取總RNA， 采用RT-PCR制備cDNA |
1周 |
詢(xún)價(jià) |
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噬菌粒的構建 與轉化 |
1、噬粒構建與轉化：以cDNA為模板、PCR擴增兔輕、 重鏈可變區基因，兔VH、VL基因拼接噬菌粒載體， 電擊轉化TG1宿主菌，構建噬菌體文庫 2、文庫鑒定：隨機挑選24個(gè)克隆，PCR鑒定陽(yáng)性率 3、文庫phage制備：文庫培養擴增+輔助噬菌體侵染包裝， 表達成phage庫 |
4-5周 |
詢(xún)價(jià) |
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噬菌體文庫篩選 |
1、采用固相篩選等多種方式，進(jìn)行親和篩選，篩選高親和力兔單抗 2、挑取96個(gè)克隆培養擴增+IPTG誘導表達+ELISA檢測陽(yáng)性克隆 3、挑取全部陽(yáng)性克隆進(jìn)行基因測序 |
4-5周 |
詢(xún)價(jià) |
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表達抗體（備選） |
選擇真核表達系統進(jìn)行表達 |
2-4周 |
詢(xún)價(jià) |
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抗體鑒定（備選） |
對純化后的抗體進(jìn)行最終鑒定，ELISA、WB、SPR等 |
1周 |
詢(xún)價(jià) |
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產(chǎn)品交付 |
1、實(shí)驗報告，包括流程，檢測報告 2、陽(yáng)性克隆序列 3、陽(yáng)性菌株 4、噬菌體免疫文庫 |
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bioss
