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    幫助中心-北京博奧森生物技術(shù)有限公司
    免疫組化問(wèn)題解答
    1、染色過(guò)強？
    • 原 因
    • 解決方法
    • 抗體濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)
    • 降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜
    • 孵育溫度過(guò)高超過(guò)37度
    • 一般在室溫20-28度
    • DAB顯色時(shí)間過(guò)長(cháng)或濃度過(guò)高
    • 顯色時(shí)間不超過(guò)5-12分鐘，以顯微鏡下觀(guān)察為準
    2、非特異性背景染色？
    • 原 因
    • 解決方法
    • 操作過(guò)程中沖洗不充分
    • 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘
    • 組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷
    • 可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長(cháng)
    • 組織中含內原性生物素
    • 正常非免疫動(dòng)物血清再封閉
    • 血清蛋白封閉不充分
    • 血清蛋白封閉不充分
    3、染色弱？
    • 原 因
    • 解決方法
    • 抗體濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短
    • 提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少于60分鐘
    • 試劑超過(guò)有效使用時(shí)間
    • 應更換試劑
    • 操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干
    • 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
      使試劑稀釋 （應防止切片干燥）
    • 室溫太低，低于15度
    • 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過(guò)夜
    • 蛋白封閉過(guò)度
    • 封閉不要超過(guò)12分鐘
    4、染色陰性？
    • 原 因
    • 解決方法
    • 操作步驟錯誤
    • 應重試，設陽(yáng)性對照
    • 組織中無(wú)抗原
    • 設陽(yáng)性對照以驗證試驗結果
    • 一抗與二抗種屬連接錯誤
    • 仔細確定一抗二抗種屬無(wú)誤
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